作者： 杨明明，段学光，张省委，吴连辉，北京中医药大学东方医院检验科
耳念珠菌（Ｃａｎｄｉｄａ ａｕｒｉｓ） ２００９ 年首次在日本发现［１］ ， 国外曾出现难以控制的爆发［２⁃４］ ，而后该菌逐渐受到关注。 中国内地最先由北京大学王辉教授团队于 ２０１８ 年报道该 菌［５］ 。 目前，我国公开报道的耳念珠菌感染病例已达 ２５ 例［６］ 。 我院于近期首次检出 １ 例耳念珠菌，现报道如下。
１ 病历资料
患者男，８０ 岁，７ 年前于外院诊断肾性贫血，间断人促红细胞生成素升红治疗，此后血肌酐逐渐升高。 ２０２２ 年 １ 月 ５ 日由 外 院 转 入 北 京 中 医 药 大 学 东 方 医 院。 体 格 检 查： Ｔ ３６．３ ℃ ，Ｐ ９０ 次／ 分钟，Ｒ ２０ 次／ 分钟，ＢＰ １２６ ／ ６４ ｍｍＨｇ。 实验室检查：白细胞 ４．４１×１０ ９ ／ Ｌ，中性粒细胞比例 ６６．４％，淋 巴细胞比例 ２４．４％，红细胞 １．８７×１０ １２ ／ Ｌ，血红蛋白 ６８ ｇ ／ Ｌ， 血小 板 ４２ × １０ ９ ／ Ｌ， 降 钙 素 原 ０． ９３１ ｎｇ ／ ｍＬ， Ｃ 反 应 蛋 白 ５９．７ ｍｇ ／ Ｌ，血肌酐 ４６７ μｍｏｌ ／ Ｌ。 中医诊断：慢肾衰，脾肾亏 虚，浊毒内蕴症。 西医诊断：慢性肾功能不全，慢性肾脏病 ５ 期，肾性贫血，肾性骨病，浆细胞肿瘤，药物性肝炎，消化道 出血，重症感染，心力衰竭。 １ 月 ６ 日，哌拉西林钠他唑巴坦 钠抗感染，口服氟康唑，透析。 １ 月 ７ 日血清 Ｇ、ＧＭ 试验结 果阴性。 １ 月 ８ 日，便潜血阳性，输注血小板帮助止血。 １ 月 ９ 日发热，最高 ３８．２ ℃ ，怕冷，患者躁动不安，完善头颅 ＣＴ 示腔隙性脑梗死，降钙素原及 Ｃ 反应蛋白持续升高，血常规 检查无明显变化。 １ 月 １１ 日乏力、发热，最高 ３８．９ ℃ ，血培 养约 ３４ ｈ 后报阳，经鉴定为耳念珠菌。 １ 月 １４ 日，肿瘤终末 期状态诱发消化道出血，循环、呼吸功能难以为继，最终病 情进展，临床死亡。
２ 微生物学检查
2.1养结果及真菌形态 １ 月 １１ 日晚抽取一套血培养 送检，采用 ＢａｃＴ⁃ＡＬＥＲＴ＿３Ｄ １２０ 全自动血培养仪（法国生物 梅里埃公司）进行检测，３４ ｈ ４８ ｍｉｎ 后需氧瓶阳性报警。 革 兰染色（珠海贝索公司）涂片镜检，镜下可见细长型真菌孢 子，形态不典型，电话通知值班医生初步染色结果并记录， 而后接种血平板、中国蓝平板及沙氏平板（赛默飞世尔公 司）。 ３５ ℃ 、５％ＣＯ２ 培养箱培养 ４８ ｈ 后，沙氏培养基上呈奶 油色光滑菌落，革兰染色镜下孢子呈长圆形。 转种 Ｂ 型念 珠菌显色平板（安图生物公司），４８ ｈ 后念珠菌显色平板上呈现粉紫色光滑菌落，革兰染色镜下孢子呈卵圆形，见图 １。
2.2菌种鉴定
2.2.１ 真菌鉴定 使用 Ｖｉｔｅｋ ２ Ｃｏｍｐａｃｔ 全自动微生物分析 系统（法国生物梅里埃公司），系统版本为 Ｒｅｌｅａｓｅ ｖｅｒｓｉｏｎ ８．０１，ＹＳＴ 真菌鉴定卡鉴定为耳念珠菌，鉴定率 ９８％。
2.2.2质谱鉴定 Ｖｉｔｅｋ ＭＳ 全自动微生物质谱检测仪（法 国生物梅里埃公司），系统版本为 ＭＳ ＩＶＤ ３．２（ＩＶＤ），鉴定结 果为耳念珠菌，置信度 ９９％。 ２．２．３ 分子生物学鉴定 使用 ＣＴＡＢ 法进行提取菌株 ＤＮＡ。 根据 ＩＴＳ 通用引物设计引物序列：ＩＴＳ１，５′⁃ＴＣＣＧＴＡＧＧＴＧＡＡＣ ＣＴＧＣＧＧ⁃３′；ＩＴＳ４，５′⁃ＴＣＣＴＣＣＧＣＴＴＡＴＴＧＡＴＡＴＧＣ⁃３′，由北京 睿博兴科生物技术公司完成引物合成和基因测序。 对 ＰＣＲ 产物进行乙醇沉淀纯化，反应体系：１５ μＬ ２×ＰＣＲ ｍｉｘ，２ μＬ ＤＮＡ 模板，１０ ｍｍｏｌ ／ Ｌ 上、下游引物各 １ μＬ，ｄｄＨ２Ｏ 补充至 总体积 ３０ μＬ。 反应参数为：９４ ℃ ５ ｍｉｎ；９４ ℃ ３０ ｓ，５０ ℃ ３０ ｓ，７２ ℃ １ ｍｉｎ，３５ 个循环；７２ ℃ ７ ｍｉｎ。 配制 ２０ ｇ ／ Ｌ 琼脂 糖凝胶，进行 ＰＣＲ 产物纯化，然后应用 ＡＢＩ ３７３０ＸＬ 测序仪 进行测序。 基因扩增可见约 ５００ ｂｐ 大小的单一清晰目的条带，测序结果经 Ｂｌａｓｔ 比对显示，与耳念珠菌序列［Ｃａｎｄｉｄａ］ ａｕｒｉｓ（ＮＲ＿１５４９９８．１）相似度为 ９８．３４％。
2.3试验 目前尚未建立关于耳念珠菌的最低抑菌浓 度（ＭＩＣ）折点，其药物敏感性试验的研究目前还是依据和参 考美国临床和实验室标准化协会（ＣＬＳＩ）其他相近念珠菌属 的推荐文件，如 Ｍ６０ 和相关专家共识所推荐的药物折点。 本次药敏试验均参考此标准，使用 ＹｅａｓｔＯｎｅＹ０１０ 型真菌药 敏 ９６ 孔板（赛默飞世尔公司）进行药敏试验，结果显示对氟 康唑、卡泊芬净及两性霉素 Ｂ 耐药，见表 １。
３ 讨论
本株耳念珠菌是由血培养标本中检出的，这与目前报 道的耳念珠菌疾病谱中血流感染为主要的感染类型（ 占 ４０％ ～ １００％）相吻合［７］ 。 国外资料显示几乎所有分离株都 对氟康唑高度耐药，一半以上的耳念珠菌株对伏立康唑耐 药，三分之一对两性霉素 Ｂ 耐药（ＭＩＣ≥２ μｇ ／ ｍＬ），少数对 棘白菌素类耐药［８］ 。 目前，国内尚未报道多重耐药的耳念 珠菌［９］ ，而我院发现的本株耳念珠菌对 ３ 类抗真菌药物均 显示出耐药，应引起高度重视。 本例患者基础疾病严重且复杂，转入我院时已有疑似 感染症状，抗感染治疗持续未停。 患者入院后 ４ ｄ 即有发热 症状，未抽取血培养，２ ｄ 后体温持续升高后才进行血培养， 说明临床医生对血培养的重视度不够。 血流感染是一种严 重的全身感染性疾病，而血培养是检测菌血症和真菌血症 最简单、最准确和最常用的方法，本病例血培养抽取延误， 导致患者死亡后才得到血培养结果。 当然，临床患者已经 患有其他严重疾病，所以耳念珠菌感染的症状可能不明显， 并且症状差异很大，因此对感染症状很难辨认，需要进行实 验室检查。 该患者存在其他多种基础疾病，这也进一步增 加了患者死亡风险。 本例病例最终死于其基础疾病的并发 症，和其他文献报告的病例相似，是多因素的临床结局［１０］ 。 本例耳念珠菌在不同培养基上形态分别为长圆形和卵 圆形酵母孢子，与文献一致［６］ ，形态学无特征性。 念珠菌显 色培养基为粉紫色，易与光滑念珠菌相混淆，显色培养基无 法作最终鉴别。 本病例血培养直接涂片为酵母样真菌孢 子，在血平板、中国蓝平板及沙氏培养基上生长良好，纯培 养物经 Ｖｉｔｅｋ ２ Ｃｏｍｐａｃｔ 及 Ｖｉｔｅｋ ＭＳ 鉴定均为耳念珠菌，与 基因测序结果完全一致，两台仪器及配套软件均为较高配 置，为快速准确向临床报告提供了有利条件。 正确鉴定要 求人员意识到位、经验充足，质控在控，结果有可信性、重复 性、可比性［６］ ，也需要先进的仪器及配套设施，这些都是其 鉴定的难点。 检验人员一旦发现要马上报备院级感染部 门，采取必要的隔离防控措施及预防传播预案［１１］ 。 引发耳念珠菌感染的外部相关危险因素包括内置导 管、侵入性医疗操作等。 总体来说，长期住院，特别是入住 重症监护室（ＩＣＵ）的患者，体内置入中心静脉导管、导尿管 等医疗器具的患者，或接受过广谱抗菌药物或抗真菌药物 治疗、肠外营养、腹部手术及免疫抑制剂等人群感染耳念珠 菌的风险较高［５，１１］ 。 检验人员要做好临床沟通工作，加强临 床医生对血培养的认识及重视度，提高血培养送检率，早发 现早治疗，尤其是耳念珠菌这种少见菌。
参考文献略。
来源：杨明明,段学光,张省委,吴连辉,韩静,张潘.耳念珠菌致血流感染1例[J].临床检验杂志,2022,40(08):639-640.
